(kwantitatieve) Analyse van peptiden en proteïnen
Cursus
Waarom de cursus (kwantitatieve) Analyse van peptiden en proteïnen
Deze cursus biedt u een breed programma over de analyse van peptiden en proteïnen met LC-MS. We bespreken LC scheidingstechnieken en massaspectrometrie van proteïnen. Ook monstervoorbewerking komt aan bod. Kwantitatieve analyse van peptiden en proteïnen is vooral van belang voor klinische biomarkers en biofarmaceutica, zoals therapeutische monoklonale antilichamen. Het programma wordt verzorgd door dr. Wilfried Niessen (hyphen MassSpec) en dr. William van Dongen (TNO Triskelion, Zeist).
Voor wie is de cursus (kwantitatieve) Analyse van peptiden en proteïnen bedoeld
Deze cursus is zeer relevant voor medewerkers van klinische laboratoria, waarin analyses van biomarkers, proteïne drugs en therapeutische biofarmaceutica worden gedaan of overwogen. Daarnaast is de cursus van belang voor andere laboratoria waar kwantitatieve analyses van peptiden en proteïnen uitgevoerd worden, bijvoorbeeld in voedingstoepassingen.
Het programma
DAG 1:
+ Wat zijn proteïnen. Aminozuur sequentie. Aminozuren als bouwstenen. Typen proteïnen. Algemene fysicochemische eigenschappen
+ Analytische scheiding van proteïnen (10-150 kDa) met RPLC, HILIC, SEC, IEX, CE. Detectie
+ Massaspectrometrie van proteïnen. Korte inleiding in ESI-MS en MALDI-MS. Molecuulgewichtsbepaling, isotopen, meerwaardig-geladen ionen, deconvolutie
+ Analytische scheiding van proteïnen (10-150 kDa) op proteïneniveau
+ Ligand-binding assays (LBAs). Basisprincipes, uitvoeringsvormen, voordelen en beperkingen van LBAs.
DAG 2:
+ Kwantitatieve analyse van proteïnen. Algemene workflow: de 7 kritische factoren
+ MS karakterisering van proteïnen - 1. Proteomics workflow; enzymatische digestie, sequentie-analyse.
+ Monstervoorbewerking van proteïnen en peptiden met traditionele analytische methoden: SPE, LLE, PP, IMAC, gelfiltratie, dialyse
+ MS karakterisering van proteïnen - 2. HPLC van peptiden: kolommaterialen (RPLC, Coreshell, UHPLC, silica/non-silica materialen, monolieten), on-line SPE-LC.
DAG 3:
+ Kwantitatieve analyse van proteïnen: signature peptiden. MS issues: SRM, optimalisatie, keuze interne standaarden. Klinisch biomarkers, low-mass (15-30 kDa) biofarmaceutica, en therapeutisch monoklonaal antilichaam. Hoog-resolutie MS (TOF, Orbitrap)
+ Vragen en antwoorden.
Methodiek
U woont interactieve presentaties bij over alle praktische en theoretische aspecten van de analyses van peptiden en eiwitten. U raakt vertrouwd met de eigenschappen van kolommen, operationele parameters voor LC-MS, gerelateerd aan relevante applicaties en voorbeelden. U werkt aan opdrachten die de theorie verder zullen verduidelijken. Ervaren (gast)docenten begeleiden u in het leerproces.
